2024年(nian)7月(yue)(yue)4日（周四），中(zhong)國老年(nian)保健協會(hui)(hui)、一味書院(yuan)(yuan)主(zhu)(zhu)辦的(de)【檢驗(yan)(yan)月(yue)(yue)月(yue)(yue)壇】系列會(hui)(hui)議第13期(qi)“多(duo)方(fang)(fang)法(fa)學(xue)(xue)(xue)助力自身(shen)抗(kang)體(ti)實驗(yan)(yan)室檢測(ce)”全國直(zhi)播會(hui)(hui)在(zai)線上如期(qi)召開。大(da)連醫(yi)科(ke)大(da)學(xue)(xue)(xue)附屬(shu)(shu)第一醫(yi)院(yuan)(yuan)李士軍教(jiao)(jiao)授擔(dan)任大(da)會(hui)(hui)主(zhu)(zhu)席并致(zhi)辭，遼寧省中(zhong)醫(yi)院(yuan)(yuan)張程教(jiao)(jiao)授，以及青島市婦女兒童醫(yi)院(yuan)(yuan)宋(song)金蓮教(jiao)(jiao)授擔(dan)任本次會(hui)(hui)議的(de)講者嘉賓。同(tong)時大(da)會(hui)(hui)還邀請了(le)中(zhong)國中(zhong)醫(yi)科(ke)學(xue)(xue)(xue)院(yuan)(yuan)廣安門(men)醫(yi)院(yuan)(yuan)安成教(jiao)(jiao)授、哈爾濱醫(yi)科(ke)大(da)學(xue)(xue)(xue)附屬(shu)(shu)第一醫(yi)院(yuan)(yuan)周海舟教(jiao)(jiao)授作為本次會(hui)(hui)議的(de)討論(lun)嘉賓。幾位專家主(zhu)(zhu)要圍繞“多(duo)方(fang)(fang)法(fa)學(xue)(xue)(xue)助力自身(shen)抗(kang)體(ti)實驗(yan)(yan)室檢測(ce)”進行了(le)深入的(de)交流和討論(lun)。
大連醫(yi)科大學附屬第一醫(yi)院 李士軍教授
開幕致辭環節，李(li)士(shi)軍教(jiao)授對(dui)線上各位觀(guan)眾的(de)(de)(de)參(can)與表(biao)(biao)示歡(huan)迎，對(dui)本次會議的(de)(de)(de)各位講者和主持人表(biao)(biao)示感謝(xie)。李(li)士(shi)軍教(jiao)授指(zhi)出自(zi)(zi)身抗(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)測(ce)(ce)對(dui)于(yu)自(zi)(zi)身免(mian)(mian)疫性(xing)疾病(bing)(bing)(bing)的(de)(de)(de)診斷、鑒別(bie)診斷、病(bing)(bing)(bing)情(qing)評估、治療(liao)監測(ce)(ce)、預后(hou)判斷有(you)(you)著非常重要(yao)的(de)(de)(de)作(zuo)用，我(wo)國在自(zi)(zi)身免(mian)(mian)疫性(xing)疾病(bing)(bing)(bing)領域的(de)(de)(de)深耕精作(zuo)已經取得了矚目(mu)的(de)(de)(de)成績，檢(jian)驗(yan)(yan)科已經有(you)(you)能力為自(zi)(zi)身免(mian)(mian)疫性(xing)疾病(bing)(bing)(bing)的(de)(de)(de)臨床實驗(yan)(yan)室(shi)診斷提供更加全面、完(wan)善的(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)方(fang)法(fa)學(xue)和檢(jian)測(ce)(ce)項目(mu)，目(mu)前(qian)自(zi)(zi)身抗(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)測(ce)(ce)有(you)(you)多(duo)種方(fang)法(fa)學(xue)，每種方(fang)法(fa)學(xue)都有(you)(you)其(qi)獨特的(de)(de)(de)應用價(jia)值和局(ju)限(xian)性(xing)，今天的(de)(de)(de)主題是多(duo)方(fang)法(fa)學(xue)聯(lian)(lian)合助(zhu)力自(zi)(zi)身抗(kang)(kang)體(ti)(ti)實驗(yan)(yan)室(shi)檢(jian)測(ce)(ce)，探討不同(tong)類(lei)型的(de)(de)(de)自(zi)(zi)身抗(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)測(ce)(ce)也有(you)(you)不同(tong)的(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)策(ce)略。而每種方(fang)法(fa)學(xue)都有(you)(you)其(qi)獨特的(de)(de)(de)應用價(jia)值和局(ju)限(xian)性(xing)，今天的(de)(de)(de)主題是多(duo)方(fang)法(fa)學(xue)聯(lian)(lian)合助(zhu)力自(zi)(zi)身抗(kang)(kang)體(ti)(ti)實驗(yan)(yan)室(shi)檢(jian)測(ce)(ce)，探討不同(tong)類(lei)型的(de)(de)(de)自(zi)(zi)身抗(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)測(ce)(ce)也有(you)(you)不同(tong)的(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)策(ce)略。
學術分享環節，張(zhang)程(cheng)教(jiao)授(shou)(shou)為大家介紹了(le)常(chang)見(jian)的自(zi)(zi)(zi)身(shen)(shen)(shen)免(mian)疫(yi)性(xing)疾病(bing)以(yi)及(ji)自(zi)(zi)(zi)身(shen)(shen)(shen)抗體(ti)(ti)對該疾病(bing)診療價值。自(zi)(zi)(zi)身(shen)(shen)(shen)免(mian)疫(yi)性(xing)疾病(bing)發(fa)病(bing)隱匿，表現(xian)復雜多(duo)樣(yang)，這給疾病(bing)診斷(duan)(duan)帶來(lai)了(le)極大的困難。而自(zi)(zi)(zi)身(shen)(shen)(shen)抗體(ti)(ti)的檢(jian)測(ce)能(neng)用(yong)(yong)(yong)于輔助疾病(bing)的診斷(duan)(duan)、鑒別診斷(duan)(duan)，病(bing)情(qing)評估，判斷(duan)(duan)預后等(deng)重要作用(yong)(yong)(yong)，在自(zi)(zi)(zi)身(shen)(shen)(shen)免(mian)疫(yi)性(xing)疾病(bing)的診療過程(cheng)起著重要作用(yong)(yong)(yong)。不(bu)僅如此，自(zi)(zi)(zi)身(shen)(shen)(shen)抗體(ti)(ti)檢(jian)測(ce)還對疾病(bing)有著預警作用(yong)(yong)(yong)。如定期檢(jian)測(ce)CCP，可以(yi)有助于提早(zao)發(fa)現(xian)類風濕關節炎。接(jie)下來(lai)張(zhang)程(cheng)教(jiao)授(shou)(shou)介紹了(le)臨床(chuang)中較為常(chang)見(jian)的自(zi)(zi)(zi)身(shen)(shen)(shen)免(mian)疫(yi)疾病(bing)，如：系(xi)統(tong)性(xing)紅斑(ban)狼(lang)瘡、抗磷(lin)脂綜(zong)合(he)(he)征、ANCA相關血管炎、自(zi)(zi)(zi)身(shen)(shen)(shen)免(mian)疫(yi)性(xing)肝病(bing)、干燥(zao)綜(zong)合(he)(he)征。張(zhang)程(cheng)教(jiao)授(shou)(shou)結(jie)合(he)(he)指南深入淺出的介紹了(le)這幾個(ge)疾病(bing)的臨床(chuang)癥(zheng)狀以(yi)及(ji)相關抗體(ti)(ti)的臨床(chuang)應用(yong)(yong)(yong)，令我們(men)受益匪淺。
緊接著宋金蓮教(jiao)授進(jin)行(xing)了題為(wei)(wei)“多方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)學(xue)(xue)助力自(zi)身(shen)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)”的(de)學(xue)(xue)術報告。宋教(jiao)授主要(yao)從三個方(fang)(fang)面(mian)(mian)展開講(jiang)解，分別(bie)是自(zi)身(shen)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)臨床(chuang)(chuang)應(ying)用(yong)和(he)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)策(ce)略(lve)、自(zi)身(shen)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)的(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)學(xue)(xue)概述(shu)和(he)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)策(ce)略(lve)推(tui)薦(jian)。宋教(jiao)授利用(yong)5個臨床(chuang)(chuang)病(bing)例生動的(de)闡述(shu)了自(zi)身(shen)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)對(dui)疾病(bing)診(zhen)(zhen)療的(de)重(zhong)要(yao)性，尤其是對(dui)于(yu)(yu)孕產婦和(he)兒童(tong)的(de)診(zhen)(zhen)療過程中發揮著重(zhong)要(yao)作用(yong)。特別(bie)是在(zai)兒童(tong)群體(ti)(ti)中，系(xi)統性紅斑(ban)(ban)狼瘡的(de)發病(bing)癥狀并不(bu)典(dian)型，往(wang)往(wang)容易(yi)誤診(zhen)(zhen)、漏診(zhen)(zhen)而耽(dan)誤治療。接下(xia)來宋教(jiao)授介紹(shao)了目前(qian)國內常見(jian)的(de)自(zi)身(shen)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)，著重(zhong)提(ti)(ti)到了間接免疫熒(ying)光(guang)(guang)、免疫印跡法(fa)(fa)(fa)(fa)、酶聯(lian)免疫吸(xi)附法(fa)(fa)(fa)(fa)、化(hua)學(xue)(xue)發光(guang)(guang)法(fa)(fa)(fa)(fa)，詳細介紹(shao)了每(mei)種檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)優勢(shi)和(he)局限性。最后宋教(jiao)授以指南為(wei)(wei)依據，推(tui)薦(jian)常見(jian)自(zi)身(shen)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)的(de)策(ce)略(lve)。宋教(jiao)授提(ti)(ti)到對(dui)于(yu)(yu)ANA檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)，推(tui)薦(jian)用(yong)間接免疫熒(ying)光(guang)(guang)法(fa)(fa)(fa)(fa)進(jin)行(xing)ANA的(de)總抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)篩(shai)查，同時(shi)對(dui)于(yu)(yu)ANA的(de)特異(yi)性抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)，需要(yao)用(yong)免疫印跡法(fa)(fa)(fa)(fa)、化(hua)學(xue)(xue)發光(guang)(guang)法(fa)(fa)(fa)(fa)等進(jin)行(xing)靶(ba)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)確(que)認。由此保證ANA靶(ba)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)全面(mian)(mian)覆蓋及單指標(biao)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)的(de)靈敏度(du)(du)，避(bi)免漏檢(jian)(jian)(jian)(jian)。對(dui)于(yu)(yu)抗(kang)(kang)(kang)dsDNA抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)，不(bu)但(dan)是系(xi)統性紅斑(ban)(ban)狼瘡的(de)特異(yi)性指標(biao)，其滴度(du)(du)變(bian)化(hua)與疾病(bing)活動度(du)(du)密切(qie)相(xiang)關，有隨訪監(jian)測(ce)(ce)(ce)的(de)價值。所(suo)以針對(dui)抗(kang)(kang)(kang)dsDNA抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)，可應(ying)用(yong)間接免疫熒(ying)光(guang)(guang)篩(shai)查，同時(shi)，ELISA和(he)化(hua)學(xue)(xue)發光(guang)(guang)法(fa)(fa)(fa)(fa)等進(jin)行(xing)定量監(jian)測(ce)(ce)(ce)。對(dui)于(yu)(yu)ANCA是ANCA相(xiang)關血管(guan)炎的(de)重(zhong)要(yao)血清學(xue)(xue)標(biao)志。2017年(nian)國際ANCA檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)專(zhuan)家共識推(tui)薦(jian)IIFT和(he)靶(ba)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)確(que)認平(ping)行(xing)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)或IIFT結果陽(yang)性，再進(jin)行(xing)靶(ba)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)確(que)認。
學(xue)術報告后，李(li)士軍教授(shou)主持討論環(huan)節(jie)，并與各位專家圍繞多(duo)方法學(xue)助力(li)自身(shen)抗體(ti)實驗室檢(jian)測相關內容進(jin)行了(le)深入的(de)交流與分享。李(li)教授(shou)結(jie)合(he)本次會議的(de)主題(ti)，以及線上觀眾的(de)提問，提出了(le)三個問題(ti)：
問題(ti)1：目前自身(shen)抗體檢測的方法眾多，其(qi)中化(hua)學發光自動化(hua)程度高，而且定(ding)量檢測，相比之下(xia)其(qi)他(ta)方法學還有(you)存在的必要性(xing)么？
安成教授：從眾多文獻的報道上來看，其實不同的方法學，在檢測的結果上有互補的作用。因為不同的檢測方法，它檢測的敏感性是完全是不一樣的，特異性也不一樣，就像宋教授介紹的，每種方法學都有獨特的應用價值和局限性。例如間接免疫熒光，是以HEp-2細胞作為檢測基質的經典方法學，HEp-2是包含二百余種自身抗體靶抗原的“天然陣列”，以其作為基質對ANA進行IFA檢測，敏感性高，是目前公認的ANA檢測的金標準，是不能夠被其他方法學取代的。以及在指南中，也是推薦多方法學聯合檢測來降低漏診、誤診。比如：2018年國內發布的ANCA檢測臨床應用專家共識推薦以乙醇固定和甲醛固定的中性粒細胞為基質的IIFT篩查及聯合ELISA確認靶抗原，可有效提高AAV的臨床診斷性能。對于臨床疑似AAV患者，可采用ELISA或CLIA直接檢測靶抗原PR3和MPO。若檢測結果陰性，但臨床仍高度懷疑AAV，應使用其他免疫學方法和/或IIFT-ANCA進行重復檢測。此外，對于IIFT檢測，為了排除ANA的干擾，建議另采用HEp-2細胞+粒細胞（乙醇固定）基質進行輔助檢測。
周海舟教授：周教授同樣認為化學發光法雖然優勢明顯，但不能替代其他方法學。周教授舉例闡述。第一個例子是PLA2R檢測，目前是以間接免疫熒光和酶聯免疫吸附法為主要的檢測方法。間接免疫熒光使用的是細胞和組織為檢測基質，保留了抗原的天然的構象，所以它的敏感度是比較高的。而酶聯免疫吸附法檢測PLA2R特異性較強。目前梅奧診所對于檢測PLA2R給出的建議是間接免疫熒光和酶聯免疫吸附法共同檢測，保證了敏感性的同時，提高特異性。第二個例子是自身免疫性皮膚病的相關檢測，同樣也是間接免疫熒光和四種靶抗原BP180，BP230， Dsg-1和Dsg-3檢測同時進行。間接免疫熒光方法學不但敏感性高，還可以區分是基底膜是表皮側還是真皮側陽性，但如果是表皮側陽性的那個提示呢，就是大皰性天皰瘡，而真皮側陽性，就提示是獲得性大皰性皮表皮松懈癥。而靶抗原檢測特異性較高，兩者結合不但能降低漏檢率，還能明確診斷，同時對臨床用藥選擇有一個很好的提示作用。
問題2：實際工作(zuo)中，經常(chang)會遇(yu)到不同方法學結果不一(yi)致的(de)情況，對此現象(xiang)一(yi)般如何(he)處理(li)和解決？
安成教授：安教授表示這個問題和第一個問題有一定的相關性。首先不同方法學采用的基質或是抗原是不一樣的。間接免疫熒光檢測ANA使用的是HEp-2細胞為檢測基質，敏感性是很好的。而且不同的核型也提示不同的疾病，對疾病的診療有著重要的作用。免疫印跡法、酶聯免疫吸附法、化學發光法使用的抗原都是經過人工處理純化的，特異性很好。作為檢驗人要把兩者結合應用到臨床中去。
周海舟教授：周教授表示在實際工作中不僅是自身抗體檢測出現這種情況，其他的免疫檢測項目也會出現這種情況。常常是同一個患者在不同的醫院進行檢測，出現檢測結果不一致的情況。針對這種情況我建議在復查時盡量在同一家醫院進行檢測，同時明確檢測方法學，以便更換就診醫院時分析比對。最后周教授提出如果檢測項目有指南推薦的金標準檢測方法，建議出現檢測結果按照金標準方法學出報告。比如雙鏈DNA的檢測，金標準就是使用綠蠅短膜蟲為基質的間接免疫熒光法檢測。所以對于雙鏈DNA的檢測，如果出現不同檢測方法學不一致的情況，建議依據熒光結果來報告。
問題3：自(zi)身(shen)抗(kang)體檢測的室內自(zi)制質控品如何操作？又如何評(ping)價？
安成教授：自身抗體檢測的質控品比較難以獲得，質控品確實免不了要實驗室自制。我們的自制質控品就是從臨床上發現的一些樣本，然后進行稀釋、評價、保存。自制質控品的評價應該包括重復性驗證、均勻性驗證、穩定性驗證等。以膜條印跡的ENA抗體質控為例，會將收集到的不同陽性樣本混合在一起進行評價，對一些難獲得、低濃度的抗體單獨加入反應池中，防止樣本混合被稀釋而表現陰性。通常在2-8℃短可保存一周，但為了長期使用，需要放在-20℃條件下保存，為了避免反復凍融，可加入甘油，使其在-20℃條件下保持液體狀態，甘油的冰點和它的濃度相關，是一個U字形的關系，-25℃的冰點時，甘油的濃度在50%左右，-40℃的冰點時，甘油的濃度大約在60%左右，隨后隨著甘油濃度增加，冰點反而上升。穩定性可通過破壞實驗來驗證。
周海舟教授：我們的自制質控品也是使用的臨床樣本來制作，選擇無溶血、黃疸、脂血、乳糜及渾濁等樣本，然后進行離心、稀釋。用于間接免疫熒光的質控品一般稀釋到濃度1:320后進行保存。我們對自制質控品的評價同樣包括重復性驗證、均勻性驗證、穩定性驗證這幾個方面。
最后，李(li)士軍(jun)教授感(gan)謝一味書(shu)院(yuan)的(de)大力支持，感(gan)謝講者(zhe)和(he)討論嘉賓(bin)的(de)精彩分享(xiang)，感(gan)謝線上聽(ting)眾的(de)積極參與和(he)關(guan)注(zhu)，感(gan)謝一味書(shu)院(yuan)、歐蒙亞太(tai)集(ji)團及(ji)各位在線工作人(ren)員(yuan)的(de)辛勤付出，至此論壇圓滿結束。
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腎病月月壇（第26期） | 多發性骨髓瘤及其腎損害的診斷與治療 
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